分子篩（SEC）無疑是許多色譜方法中最精細的存在。高分辨率，高性能的色譜柱對于獲得令人滿意的實驗結果至關重要。剛剛接觸過層析成像的小朋友們已經接管了這個精致的支柱。你不覺得有一種心跳加速，沒有開始的感覺嗎？如何保持如此精致的支柱？別擔心，讓我們了解一下?

首次使用建議：

在連接色譜柱之前，請務必確認流路中沒有空氣！通常，柱子儲存在20％乙醇溶液中以避免微生物的增殖，但20％乙醇的粘度高于水溶液的粘度，因此需要降低。流速可防止床被壓縮。

  結論是：

將色譜柱連接到系統，確保連接時色譜柱前部的流路中沒有氣泡;

使用緩沖液置換色譜柱中的酒精時，使用低流速;

如有必要，測試色譜柱的耐壓參數（增加系列）;

您的專欄已準備就緒

剛才我們也提到了效率測量。這個參數是什么？我們應該做什么？

色譜柱效率是測量色譜柱和儀器性能的快速方法。也許你會問，我們一直在談論專欄，為什么我們提到這個樂器？實際上，儀器管道的厚度為、死體積會對柱效應的結果產生影響，因此，要評估一列的性能，需要相同的儀器是在相同的實驗條件下進行的。通常，我們可以使用1％體積的1％丙酮來吸收280nm處的檢測。具體操作在每列的手冊中詳細描述。此外，?KTA儀器還可以通過峰值積分快速計算結果。

在實驗過程中需要注意哪些方面？

1.低溫操作：為了保護蛋白質的穩定性，許多小伙伴選擇在低溫下進行色譜分析。然后必須提醒您，當溶液冷時粘度會增加，所以一定要降低流速。此外，重要的是要注意所有溶液都保持與色譜柱相同的溫度，以避免因溫度變化而引入氣泡。

2.樣品制備：良好的樣品是實驗成功的第一步。對于分子篩，所有樣品必須通過0.22μm過濾器（或10,000 g，10分鐘以除去上清液）過濾，以防止顆粒堵塞色譜柱。此外，在實驗過程中，必須確保樣品在pH值為、的條件下不會變性或聚集和沉淀。如果您需要使用增溶劑（如洗滌劑），請確保在實驗過程中同時添加樣品、溶液。3.緩沖溶液：分子篩屬于非吸附色譜。只需要一個緩沖溶液。它具有很好的兼容性?；旧?，我們只需要考慮蛋白質的穩定性來選擇合適的緩沖液。通常，我們將在實驗中添加150-300mM NaCl以減少非特異性吸附。當使用不同的溶液時，由于溶液本身的粘度不同，請降低流速以保護色譜柱。

4.常規清潔：定期清潔可延長色譜柱的使用壽命并保持良好的分離度。清潔頻率與實際條件有關，例如樣品和分辨率要求。通常，如果色譜柱頂部有顏色變化，或者色譜柱的背壓增加，分辨率降低等，則會提示我們及時清潔色譜柱。對于Superdex和Superose系列色譜柱，通常建議進行反向清洗，Hiprep Sephacryl系列色譜柱通常是向前清洗的。最常見的清洗方法是使用1柱體積的0.5M NaOH（Superdex和Superose系列）或0.2M NaOH（Sephacryl系列），并立即用2柱體積的水和2柱體積的緩沖液平衡，切不要存放NaOH溶液中的色譜柱很長一段時間。

如果常規清洗仍未達到預期效果，可根據殘留物選擇其他清洗方法：例如：0.5M乙酸溶液，1M NaOH，8M尿素或6M鹽酸胍（用于蛋白質沉淀），30％異丙基酒精（對于脂質或疏水性物質，也可以考慮用胃蛋白酶消化（1毫克/毫升，在0.1M乙酸中加入0.117乙酸溶液），然后用NaOH洗滌。

5.儲存：如果色譜柱使用時間超過2天，建議用2倍柱體積的水清洗色譜柱，然后用2倍柱體積的20％乙醇沖洗色譜柱。 （Hiload Superdex 30pg和Hiload Superdex 75pg建議在20％乙醇中加入0.2M NaAc以維持pH穩定性）。再次，20％乙醇的粘度比較高，請注意降低流速。如果長時間存放或需要運輸，請連接保護裝置，以避免因環境變化而引入氣泡。

事實上，沸石分子篩的使用并不復雜。只要你大膽耐心，你就能獲得良好的實驗結果?